Teste rápido de adenovírus - secreção nasal

Uso pretendido:

O kit de teste de ácido nucleico SARS-CoV-2 é aplicado à detecção qualitativa de ácido nucleico de COVID-19 em swabs nasofaríngeos, swabs orofaríngeos e escarro. Os resultados dos testes fornecem base de diagnóstico molecular para infecção ou pacientes suspeitos, e não devem ser usados ​​como único critério para o diagnóstico clínico.

Materiais:

Procedimento de teste:

A. Preparação de Amostras

O RNA extraído é o material inicial para o kit de teste de ácido nucleico SARS-CoV-2.

Importante: Cada procedimento de extração de ácido nucleico deve ser realizado simultaneamente com um controle positivo (40 μL, diluir com soluções salinas estéreis/PBS para o volume desejado) e um controle negativo (40 μL, diluir com soluções salinas estéreis/PBS para o volume desejado).

Recomenda-se o uso dos seguintes kits comerciais de extração de ácido nucleico: Mini Kit PureLinkTM Viral RNA/DNA (Invitrogen); Mini kit de RNA viral (QIAGEN); Kit TIANamp Hi-DNA/RNA (TIANGEN);

B. Configuração da mistura de reação

1. Todos os reagentes e amostras devem ser completamente descongelados, completamente misturados e centrifugados brevemente à temperatura ambiente (faixa aproximada de 18 a 25 graus) antes do uso.

2. Prepare o volume necessário da mistura de reação em um tubo de microcentrífuga de polipropileno de tamanho apropriado.

3. Pipete 25 µL da Mistura de Reação em cada poço necessário de uma placa de reação de 96-poço óptico apropriado ou um tubo de reação óptico apropriado.

C. Adição de modelo

1. Adicione 5 μL de RNA extraído de Amostras/Controle positivo/Controle negativo. O volume total é de 30 μL.

2. Misture bem as amostras e os controles com a Reaction Mix pipetando para cima e para baixo/Vortex.

3. Feche a 96-placa de reação do poço com tampas apropriadas ou filme adesivo óptico e os tubos de reação com tampas apropriadas.

4. Centrifugue a 96-placa de reação do poço em uma centrífuga com um rotor de placa de microtitulação por 30 segundos a aproximadamente 2.500 rpm.

D. Programando o Instrumento de PCR em Tempo Real

Para obter informações básicas sobre a configuração e programação dos diferentes instrumentos de PCR em tempo real, consulte o manual do usuário do respectivo instrumento. O ensaio foi otimizado para o sistema ABI7500 Real-Time PCR. A execução de PCR é realizada com condições de ciclagem conforme descrito na tabela abaixo.

Defina os detectores de fluorescência

*Por favor, defina a referência interna de fluorescência do instrumento para "Nenhum", por exemplo: Para instrumentos da série ABI, defina "Referência passiva" para "Nenhum".

E. Análise de dados

Por favor, defina os parâmetros de análise e analise os dados de acordo com as instruções de operação dos instrumentos relevantes.

Tome o ABI 7500 como exemplo:

A linha de base deve ser definida para um intervalo que elimine a fluorescência de fundo encontrada nos primeiros ciclos de amplificação, mas que não se sobreponha à área onde os sinais de amplificação se elevam acima do fundo (Valor inicial: 3~10; Valor final: {{2} }). O Cycle Threshold (Ct) deve estar na base da fase exponencial. Clique em "Análise" para obter o resultado da análise automaticamente e leia o resultado da detecção na janela "Relatório".

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